柱式总RNA提取试剂盒(Trizol)

产品货号：

GS0041

中文名称：

柱式总RNA提取试剂盒(Trizol)

英文名称：

SPIN-10 Column Trizol Total RNA Isolation Kit

产品规格：

20次|100次

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒用Trizol提取总RNA，得到的总RNA通常不含有siRNA、snRNA、5.8S rRNA、5S rRNA和tRNAs等200nt以下的RNA。该试剂盒采用的Trizol具有超强的裂解能力和抽提灵敏度，结合试剂盒采用特殊的吸附膜，大大增强了RNA的得率。得到的RNA纯度好，完整性高。该试剂盒适用于各种细胞或组织中的RNA的抽提，提取的总RNA没有DNA和蛋白污染，可用于Northern blot、Dot blot、poly A筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。

适用范围广。
操作简单快速，整个过程20分钟左右完成。
纯度高，污染少。

组分	20次	100次
Trizol Reagent	12mL	60mL
RPE Solution	5mL	25mL
DEPC-treated ddH2O	1mL	5mL
SPIN-10吸附柱及收集管	20套	100套

保存：室温

Trizol是强腐蚀性物质，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

试剂准备

自备试剂：无水乙醇、氯仿等。
按瓶身标签说明在RPE Solution中加入4倍体积的无水乙醇，混匀后在瓶身做好标记。密封保存。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持RPE Solution中的乙醇含量。若RPE Solution由于运输或保管不当造成容量不准，请用量筒定容后再加入相应体积的无水乙醇。
去酶处理：RNase是导致RNA降解最主要的物质，非常稳定。在一些极端的条件可暂时失活，限制因素去除后又迅速复性。常规的酸、碱以及加热方法不能使RNase完全失活。RNase广泛存在于人的皮肤上和体液及环境中，因此制备RNA时必须经常更换手套，同时戴上一次性口罩和卫生帽，并保证环境清洁。塑料制品、玻璃和金属物品、实验仪器等可以使用百奥莱博的固相表面RNase清除剂(货号：GS2320)，对于实验溶液试剂的处理可以使用百奥莱博的液相RNase清除剂(货号：GS1945)。
样品保存：匀浆后，加氯仿前，样品可在-70℃放置一个月以上；提取的RNA样品可以在70%酒精中-20℃保存2个星期以上；如果需要长期保存，请于超低温冰箱中保存。

植物组织或真菌：取新鲜样品在液氮中充分研磨或将其剪碎后直接在Trizol中研磨。约50mg样品使用0.5mL Trizol。
- 研磨要迅速，最好不要超过1分钟。
- 对于丝状真菌也按照50mg/0.5mL Trizol进行上述处理。
动物组织：取新鲜或-70℃冻存组织，每15～25mg组织加入0.5mL Trizol，用匀浆器匀浆处理。
- 样品体积一般不要超过Trizol体积的10%。
单层培养细胞的收集：可直接在培养容器中裂解（培养面积不超过0.5×10cm²，细胞不超过1×10⁷），或者使用胰蛋白酶处理后离心收集细胞沉淀。
- 直接裂解法：直接在培养板中加入Trizol裂解细胞，每0.5×10cm²面积加0.5mL Trizol。用移液器吹打混匀。
  - Trizol加量根据培养板面积决定，而不是由细胞数决定，如果加入的量不够，将导致提取的RNA中有基因组DNA污染。
- 胰蛋白酶处理法：收集细胞并大致确定细胞数量，用PBS洗涤细胞后，向细胞中加入含有0.1～0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至无RNase的离心管中，5000rpm离心5min，收集细胞沉淀，去除上清。每0.5×10cm²面积加0.5mL Trizol。用移液器吹打混匀。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则裂解不完全，降低RNA得率。
细胞悬液：离心收集细胞。每5×10⁶～10⁷动物、植物和酵母细胞或每5×10⁷细菌细胞加入0.5mL Trizol。
- 加入Trizol前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。
- 对于难以裂解的酵母和革兰氏阳性菌需要液氮研磨或匀浆器匀浆。
血液处理：取0.25mL新鲜或冻溶的血液，12000rpm离心5min，去除血浆，加入0.5mL Trizol，充分振荡混匀。

将裂解后样品或匀浆液室温放置5～10min，使得核蛋白与核酸完全分离。
- 样品中如含有较多的蛋白质、多糖、脂肪或其他细胞外基质，可以12000rpm离心10分钟，移去漂浮的油脂，取上清。
加入0.2mL氯仿，剧烈振荡30sec，室温放置3min。12000rpm 4℃离心10min。
- 如不能旋涡混匀，可手动颠倒混匀2分钟。
- 样品会分成三层：上层水相，中间层和下层有机相。RNA在上层水相中。
吸取上层水相转移至干净的离心管中，加入1/2倍体积无水乙醇，混匀。
- 不要吸取任何中间层物质，否则会出现染色体DNA污染。
- 加入无水乙醇后，可能会产生半透明纤维状悬浮物，不影响提取和应用。
将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加至吸附柱中，静置2min，12000rpm离心3min，倒掉收集管中废液。
将吸附柱放回收集管中，加入500μL RPE Solution，静置2min，10000rpm离心30sec，倒掉收集管中废液。
- RPE Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。
重复步骤5一次。
将吸附柱放回收集管中，10000rpm离心2min。
- 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
将吸附柱放入干净的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入30μL DEPC-treated ddH2O，静置5min，12000rpm离心2min，将所得到的RNA溶液置于-70℃保存或用于后续试验。
- RNA在-70℃保存，以防降解。
- 若想提高RNA得率，可重复步骤8一次。
- 请勿使用小于30μL的洗脱液进行洗脱。

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